連関資料 :: 唾液分泌
資料:2件
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唾液分泌（ラット耳下腺腺房細胞からのアミラーゼ分泌）
- 2006/11/06-07 実験題目：唾液分泌（ラット耳下腺腺房細胞からのアミラーゼ分泌） 実験者：windowsxp 共同実験者：Mac 目的・緒言： 唾液腺房細胞からのアミラーゼ分泌はムスカリン様受容体もしくはα1アドレナリン受容体、 Substance P受容体が刺激を受けて細胞内カルシウム濃度が上昇することで、またはβアドレナ リン受容体が刺激を受けて細胞内 cAMP濃度が上昇することで活性化される。今回の実験では AC ｈでムスカリン様受容体を、Isoproterenol でβアドレナリン受容体をたたきそれぞれの系での アミラーゼ分泌を測定する。 唾液腺は自律神経の二重支配を受けている。副交感神経は延髄の下唾液神経核から舌咽神経を 経て耳神経節に至り、ここから耳下腺を支配する。また延髄の上唾液神経核から顔面神経、鼓索 神経、舌神経を経てから、腺の近傍でニューロンを変えて顎下線おとび舌下腺を支配する。交感 神経系は T1～T4から出て、上顎神経節でニューロンを変えて唾液腺を支配する。 図 1 腺房細胞の唾液分泌の機序 材料：ラットの耳下腺 試薬：HEPES buffer、コラゲナーゼ typeⅡ、BSA、ACh および Isoproterenol、基質緩衝液 1 ml （0.4 mg のデンプンを含む）、発色試薬 手順： 1．安楽殺したラットから唾液腺（耳下腺）を採取した。 2．HEPES bufferを入れたシャーレ内で耳下腺から脂肪組織およびリンパ節等をできるだけ取 り除いた。 3．耳下腺を小鋏で細断した(約 400 回)。 4．細胞分離液（コラゲナーゼ typeⅡ・BSA1％を含む HEPES buffer）5ml 入りの小フラスコ にミンチ状にした耳下腺を入れ、100％酸素を 10 秒間通気した後、15 分ごとに軽くピペッテ イングしながら 37℃で 30 分間インキュベーションした。 5．フィルターユニットを用いて細胞分離液を濾過した。 6．400G× 10 秒で遠心した後、上清を捨てた。さらに 5ml の BSA入り HEPES bufferを加え てピペッテイングし、遠心した。この操作をもう一度繰り返した。 7．2 回目の遠心上清を捨てた後、BSA入り HEPES bufferを 5ml 加えた。ピペッテイングし た後に細胞懸濁液を新しい三角フラスコに移し 37℃で 30 分間インキュベーションした。 8．細胞懸濁液を遠心管に移し、400G× 10 秒で遠心した。 9．ペレットを巻き上げないように注意しながら、上清を取り除いた。 10．3ml の BSA 入り HEPES bufferを加え､ゆっくりとピペッテイングしながら 3 本の test tube(No.1-3)にそれぞれ 1ml ずつ分注した（下表）。 11．No.2および 3 の tube にそれぞれ ACh および Isoproterenol の Stock solution を 3μ|加え た。これらを 37℃で 30 分間インキュベーションした。 12．インキュベーション終了後、400G× 10 秒で遠心し、上清から 500μ|採取しサンプチュー ブに移し氷上で保存した（下表）。 Sample 1 Sample 2 Sample 3 Sample 4 Sample 5 Control + ACh + Isoproterenol 蒸留水 HEPES+BSA ※ACh、Isoproterenol は加えた時点で
- レポート 医・薬学 唾液分泌 アミラーゼ 唾液腺房細胞
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