資料紹介
分子生物学実験
＜目的＞
遺伝子の増幅と解析の原理と方法を理解するとともに、具体的な手法を身につける。
＜原理＞
カラーセレクションの原理
クローニングベクターであるpBluescriptは制限酵素EcoRIによってMCS部が切断される。同様に目的のDNAもEcoRIによって切断されるので、これらを連結させることができる。なお、クローニングベクターには、制限酵素を用いたクローニングの操作がやりやすいように、制限酵素部位または制限部位が、１カ所に集まるように設計されており、マルチクローニングサイト（MCS）と呼ばれている。ＭＣＳには、使用頻度の高い制限酵素部位が集められていて、しかもほとんど制限部位がベクター内で唯一の部位になるように設計されている。つまり、ＭＣＳ領域内のある制限酵素部位を、対応する制限酵素で切った場合、そこ１カ所のみが切断されるので、ベクターの必要要素を失うことなく、クローニングができる。
そして、目的のDNA断片を連結させたpBluescriptをコンピテントセル化したJM１０９株に導入して形質転換を起こす。
しかし、連結反応の段階において、セルフライゲーションが起こり、目的のDNA断片がMCSに挿入されずに元に戻るという可能性が生じる。
この場合、カラーセレクションを行うことで、目的のDNA断片がMCSに挿入されたかどうかを区別することができる。
ベクター：pBluescript
宿主細胞：コンピテントセル化したＪＭ１０９株
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分子生物学実験
＜目的＞
遺伝子の増幅と解析の原理と方法を理解するとともに、具体的な手法を身につける。
＜原理＞
カラーセレクションの原理
クローニングベクターであるpBluescriptは制限酵素EcoRIによってMCS部が切断される。同様に目的のDNAもEcoRIによって切断されるので、これらを連結させることができる。なお、クローニングベクターには、制限酵素を用いたクローニングの操作がやりやすいように、制限酵素部位または制限部位が、１カ所に集まるように設計されており、マルチクローニングサイト（MCS）と呼ばれている。ＭＣＳには、使用頻度の高い制限酵素部位が集められていて、しかもほとんど制限部位がベクター内で唯一の部位になるように設計されている。つまり、ＭＣＳ領域内のある制限酵素部位を、対応する制限酵素で切った場合、そこ１カ所のみが切断されるので、ベクターの必要要素を失うことなく、クローニングができる。
そして、目的のDNA断片を連結させたpBluescriptをコンピテントセル化したJM１０９株に導入して形質転換を起こす。
しかし、連結反応の段階において、セルフライゲーションが起こ...
